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Northern Blot實驗外包

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Northern Blot或稱RNA印跡,是通過測定樣品中的RNA以檢測基因表達的分子生物學操作。通過檢測細胞分化過程中或細胞在不同環(huán)境條件下特定基因的表達情況可觀察到細胞調控或了解細胞功能等。

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更新時間:2020-05-14
廠商性質:代理商
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或稱RNA印跡,是通過測定樣品中的RNA以檢測基因表達的分子生物學操作。通過檢測細胞分化過程中或細胞在不同環(huán)境條件下特定基因的表達情況可觀察到細胞調控或了解細胞功能等。

 

Northern blotting技術流程包括采用電泳分離RNA,隨后通過與目的RNA互補的雜交探針進行對目的RNA的檢測。由于核算帶負電荷,因此帶有正電荷的聚酰胺膜有較高的膜轉移效率。并且轉移緩沖液常含有甲酰胺,其可降低探針和RNA結合所需溫度,因此可降低RNA在高溫下變性的風險。RNA轉移到膜后,通過UV或加熱可與膜進行共價結合。隨后加入已標記的探針進行探針和目的RNA的片段的雜交,并進行膜的洗滌以洗去未特異性結合的探針已消除背景。后,雜交信號可被X-ray檢測并且進行定量。

 

操作流程大致如下:

1.        RNA的提取

2.        電泳

3.        將RNA從變性膠轉移到硝酸纖維素膜或尼龍膜

4.        UV或熱固定法將RNA固定到膜上

5.        探針標記

6.        雜交,洗膜

7.        圖像分析

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