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大腸桿菌在表達蛋白過程中越來越少？

大腸桿菌表達系統是目前應用*泛地蛋白表達系統。它具有：遺傳背景清楚；易于培養和控制；轉化操作簡單；表達水平高；成本低；周期短等特點。同時是常用也是經濟實惠的蛋白表達系統，在基因表達技術中發展最早。主要可能有兩種原因，一種是大腸在加入IPTG等誘導劑后大腸停止生長或者裂解，這時候我們要考慮蛋白本身對該菌是有一定毒性的，這時候我們可以選擇一些采用嚴緊控制的宿主菌株，比如帶有pLysS的菌株。另外一種原因就是很令人頭疼的了，當我們發現出現大面積搖瓶中細菌量逐漸降低甚至培養基回復到澄...

如何對包涵體蛋白進行表達與復性

關于包涵體的復性一直是生物制藥的瓶頸，包涵體的處理一般包括這么幾步：菌體的破碎、包涵體的洗滌、溶解、復性以及純化。一、包涵體蛋白的表達在平板上挑取單菌落，接種于含有氨芐青霉素和卡那霉素抗性的5mlLB培養基中，37℃過夜培養，然后轉接到100mlLB培養基中，37℃培養至A600為0.4~0.6時，加入IPTG至終濃度為0.5mmol/L誘導3.5h。8000r/min離心5min收集菌體，加入10ml50mmol/LTris-HCl，冰浴下超聲波破碎后12000r/min離...

多克隆抗體制備的常見問題解析

多克隆抗體制備能識別出與免疫原蛋白具有高同源性的蛋白，或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白，例如當未測試物種中的抗原性質未知時，有時會使用多克隆抗體。可識別多個結構域，即使原始抗原的一些空間結構或者序列發生小變化或者部分抗原決定簇變化，仍可以識別抗原，因此有更大的適應性。多克隆抗體制備的常見問題解析：1、免疫動物該如何選擇？選擇宿主動物時，一般要考慮兩個問題：（1）免疫效果能否保證。特別是對于蛋白抗原的情況，為了保證免疫成功，就要求宿主動物與抗原來源物種之間有較遠的親緣關...

雙特異性T細胞銜接抗體

雙特異性抗體（bispecificantibody,BsAb）,擁有兩個不同的抗原結合位點，從而同時與兩個靶抗原結合，在發揮抗體靶向性的同時，介導另外一種特殊的功能，例如一個結合靶細胞上的特異抗原，另一個結合淋巴細胞或者吞噬細胞等效應細胞，從而在腫瘤診斷及治療過程中發揮傳統抗體**的優勢。作為最新應用的BispecificTCellEngager(BiTE)與傳統抗體相比在組織滲透率、殺傷腫瘤細胞效率、脫靶率和臨床適應癥等指標方面具有較強的競爭力，臨床應用優勢顯著。特別在使用...

安諾倫代理Detroit R&D品牌——用于心血管疾病和癌癥的研究

DetroitR&D,Inc.成立于1997年，由HyesookKim博士創立，致力于通過jianduan技術提供最高質量的產品，與研究界建立信任關系。底特律研發一直穩步建立自己作為一個世界范圍內的新型診斷和藥物篩選產品的來源。DetroitR&D研發實驗室和辦公室位于密歇根州底特律市一個新的再開發區的中心。DetroitR&D研發公司的原始項目旨在開發簡單廉價的高血壓試劑盒，用于測量血液，尿液和組織中的新型脂肪酸生物標志物，現已發展成為一家在高血壓，中風，心血管疾病和糖尿病...

支原體污染細胞后清除支原體常用方法有哪些？

1）對于非重要的細胞，如培養中的細胞、WCB的細胞等，將培養物與用過的培養基滅活后丟棄即可。對于較為重要的細胞，如來源珍貴或實驗室中細胞保藏量較小等可以采用以下（2）-（8）的方法。2）動物體內接種除菌法：把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物皮下或腹腔中，借動物免疫系統消滅支原體，而腫瘤細胞卻能在體內繼續生長，待一定時間后，從體內取出細胞再進行培養繁殖。3）用清洗純化法清除支原體污染的方法：細胞營養馴化→優質細胞群的篩選→細胞清洗→反復離心洗滌，其原理是利用離心力、細胞、微...

單克隆抗體/雜交瘤細胞定制服務

雜交瘤技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經抗原免疫的免疫動物脾細胞（如小鼠B淋巴細胞）和具有永生功能的腫瘤細胞（如小鼠骨髓瘤細胞）。被特異性抗原免疫的免疫動物脾細胞（B淋巴細胞）的主要特征是它的抗體能夠分泌產生結合抗原特定位置（表位）的抗體，但其自身不能在體外連續培養，具有永生功能的腫瘤細胞（骨髓瘤細胞）則可在培養條件下無限分裂、增殖，即具有所謂永生性。在選擇培養基的作用下，只有由一個B淋巴細胞與一個骨髓瘤細胞融合的雜交瘤細胞才能具有持...

關于細胞培養基的問題

一、為什么你公司液體培養基1640顏色發黃，是pH值不對嗎？不是。因為配方原因，1640為堿酚紅型，其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一，所以是因為酚紅濃度低，而非PH值低。二、液體培養基可以放-20℃保存嗎？不可以！因為在-20℃下，培養基中的鹽容易析出，培養基融化后，有的鹽可能無法重新溶解，從而導致培養基滲透壓降低，培養細胞時，細胞容易破裂而死亡。三、為何培養基保存于4℃冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值越來越偏堿性？培養基保存于4℃冰箱中，培養基內之CO2會逐漸溢出，造成...